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免疫印迹实验--Westernblotting的操作步骤

来源:化工产品网-原创 发布时间:2023-08-01 15:07:26
免疫印迹实验--Westernblotting的操作步骤

Westernblotting是一种常用的免疫印迹实验技术,可用于检测蛋白质的存在、定量和识别。以下是Westernblotting实验的操作步骤。

1. 蛋白样品制备:取得所需蛋白样品,通过离心、加热或电泳等方法进行蛋白质提取和分离,得到纯化的蛋白样品。

2. SDS-PAGE电泳:将蛋白样品通过SDS-PAGE电泳分离,然后将蛋白质转移到聚丙烯酰胺凝胶膜上。

3. 膜上抗原-抗体反应:将膜浸泡在含有特定一抗体的缓冲液中,使其与被检测蛋白质结合。随后,将膜浸泡在含有与一抗体特异性结合的二抗体的缓冲液中,使其与一抗体结合。

4. 蛋白质检测:加入荧光素底物,使膜上的蛋白质发生化学反应,并通过光学成像设备对反应产物进行检测和定量。

Westernblotting实验是一种非常常用的蛋白质检测技术,其操作步骤简单易行,但需要注意样品制备、电泳和抗原-抗体反应过程中的细节问题,以保证实验的成功。


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